ELISA試劑盒質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量。在實(shí)驗(yàn)室，對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意，通常的做法是，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題，其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。
ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果也是有三大條件的，下面就讓我們來(lái)具體看看是哪些吧！
一、ELISA加樣步驟
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血kuai收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保留。
二、固相載體
ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑，良好的儀器和準(zhǔn)確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定，有些則需經(jīng)預(yù)處理。
三、標(biāo)本因素
血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)留意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開(kāi)釋出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操縱步驟的留意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELSIA，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，嚴(yán)格遵照劃定操縱，必能得出正確的結(jié)果。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產(chǎn)氣憤泡。有此測(cè)定需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。
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