大鼠ELISA試劑盒加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成。應(yīng)當(dāng)注意以下幾點(diǎn)
1．血清：
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)液后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．組織勻漿：
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)液，再經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。
4．血漿：
ELISA試劑盒可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，小鼠ELISA試劑盒或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
5．尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。
操作步驟：
1.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
10.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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